堀居拓郎、山﨑美帆、森田純代、木村美香、畑田出穂（群馬大学 生体調節研究所 ゲノム科学リソース分野） 荒井勇二　（国立循環器病研究センター　分子生物学部） 山﨑美帆、安部由美子（群馬大学大学院 保健学研究科） 山﨑美帆、伊藤理廣　（群馬中央病院 産婦人科）

概要

CRISPR/Casゲノム編集法は１年前に開発されたゲノム編集法で、この方法を使えば標的DNA配列を含む短いRNA(gRNA)とCas9というバクテリア由来のDNA２本鎖切断酵素だけで、どんな配列のDNAでも配列特異的に切断できます。この方法を用いてgRNAとCas9を受精卵にインジェクションすることによりノックアウトマウスが作製されるようになりましたが、どのようにしてインジェクションして作製するのが効率が良いかは検討されていませんでした。今回私たちは、国立循環器病研究センターの荒井室長と共同で（１）前核へDNA、（２）前核へRNA、（３）細胞質へRNA、の３通りのインジェクション方法を検討しました。その結果、細胞質へRNAをインジェクションするのが、発生率(図２)、ノックアウトの効率(図３)ともに最も効率が良いことを発見しました。今後、このインジェクション方法により効率よくノックアウトマウスを作製できることが期待されます。

原著情報

Validation of microinjection methods for generating knockout mice by CRISPR/Cas-mediated genome engineering.
Horii T, Arai Y, Yamazaki M, Morita S, Kimura M, Itoh M, Abe Y, Hatada I.
Scientific Reports 4:4513, 2014

オンラインURL

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24675426

研究室URL

http://epigenome.dept.showa.gunma-u.ac.jp/~hatada/index.php?id=47